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高效液相色譜熒光快速測定保健食品中的葉酸

2016年03月01日 14:48  來源:中國干果加盟網  作者:[db:作者]  人氣:2095

  高效液相色譜熒光快速測定保健食品中的葉酸黃宏南陳宏靖黃健文2(1福建省衛生防疫站,福州350001;2福建醫科大學,福州350004)0657.7于食品成分比較復雜,試樣處理煩瑣費時,而測定的是葉酸鹽活性,需制備各種培養基和菌種,步驟多又費試劑。本文采用反相篼效液相色譜熒光法測定保健食品中的葉酸含量,方法簡單、快速且準確度及精密度都能滿足分析要求。

  1材料和方法1.1儀器與試劑LC-4A高效液相色譜儀,RF-510LC熒光檢測器,C-R1B色譜處理機,日本島津公司產品。甲醇HPLC級,石英亞沸高純水,葉酸標準儲備液精確稱取葉酸標準品(由Sigma公司出品)50mg加入檢測用流動相溶液定容為50ml,置4冰箱內儲存、有效期為1~2個月。臨用時用流動相溶液稀釋成lOfig/ml. 1.2試樣處理稱取0.5g~l.Og研細的試樣于10ml離心管中,加入流動相溶液10ml,超聲波提取15min,取出加流動相定容10ml,搖勻,用0.45/m微孔過濾,濾液用作HPLC分析1.3色譜條件色譜柱:shim柱溫:室溫焚光檢測器:=365nm,Em流動相。甲醇:水=30:70流速:Iml/min進樣量:10pd. 1.4計算在給定儀器條件下進行試樣測定,以保留時間定性,峰面積外標法定量,計算試樣含量XV V定容后的體積,mlC一標準溶液濃度,2結果與討論2.1色譜柱的選擇自從70年代中期,化學鍵合相色譜的發展十分迅速,已有報道用于葉酸的分離。W由于保健食品中葉酸大多以游離形式存在,不含磷酸根,所以最適合用C18填料RP-HPLC分離。

  2.2檢測波長的選擇對葉酸標準溶液進行熒光光譜掃描,其最大激發波長為365nm,最大發射波長為450ran,因此我們選擇Ex=365nra,Em=450nm進行測定,具有較高靈敏度。

  2.3流動相的選擇葉酸屬維生素B族類物質,有些將其寫成維生素Bc考慮到B族維生素在甲醉:水=30:70流動相體系能得到較好的分離,而且保健食品中的維生素通常是多種混合體,為了達到同時、快速測量,減少體系交換平衡時間,我們選擇以上流動相體系,實驗證明在出峰時間,洗脫效果,排除雜質干擾方面效果理想。

  2.4檢測濃度的線性范圍分別配制濃度為5,10,20,30,40,的葉酸標準溶液,在給定儀器條件下進行HPLC分析,以峰面積對濃度做校正曲線,得線性回歸方程和相關系數分別為:Y= 2.5方法精密度精密稱取少兒健維士(多種維生素補充劑)2.6方法準確度精密稱取少兒健維士粉0.4g,加人0.5ml葉酸標準溶液,按試樣測定步驟操作測定6次,其平均回收率為98.67%,RSD為1.83%. 3小結本方法簡便、快速、靈敏度高,其精密度、準確度均達到分析要求。適合保健食品中葉酸的測定。

(完)

 
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